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Breve descrição do processo de cromatografía de troca iônica, usando uma resina de DEAE celulose para a purificação da enzima alfa-glicosidase a partir do lisado feito anteriormente.
Breve descrição da prática 1 do curso de Bioquímica experimental, Lise celular de células de levedura.
Neste vídeo descrevemos a importância das proteínas em células e seu papel central na indústria biotecnológica. Colocamos também a absorção de luz UV-VIS pelas biomoléculas, em particular as proteínas. Discutimos os métodos indiretos para dosar proteínas, com ênfase no método de Bradford.
Apresenta-se uma visão geral da espectrometria de massas e de suas aplicações na bioquímica de proteínas.
Na segunda parte da aula demonstra-se como a SDS-PAGE 2D é utilizada para determinar a massa molecular e o ponto isoelétrico de proteínas desconhecidas.
O processo de eletroforese é discutido e comparado com o processo de cromatografia. São apresentados os tipos de eletroforese (nativa, redutora e não-redutora) em uma e duas dimensões e são discutidas suas aplicações.
Visão geral do processo de purificação de proteínas a partir de lisados celulares ou de outros tipos de mistura de proteínas. Discutem-se também as vantagens e aplicações de proteínas purificadas.
Bases teóricas e experimentais da purificação de proteínas. Simulação da purificação de proteínas.
Breve descrição da prática 5, em que determinaremos a atividade enzimática em relação a diferentes concentrações de para-nitrofelil alfa glicosídeo (substrato) para a enzima alfa glicosidase presente no lisado total feito anteriormente.
Breve descrição do processo de medida da atividade alfa-glicosidase recuperada na cromatografía feita anteriormente e no lisado total. Variação do tempo. Enriqueciemento e recuperação.
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